杨晶 , 张广臣

吉林农业大学, 长春, 130118
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 22 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000611
收稿日期: 2013年03月28日    接受日期: 2013年05月22日    发表日期: 2013年06月18日

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用试剂盒法提取菜豆(Phaseolus vulgaris L.)嫩叶的基因组DNA，并以此为模板对影响ISSR-PCR反应体系的Taq酶量、模板浓度、dNTP浓度、Mg²⁺浓度、引物浓度5个因素进行了优化。结果表明总体积为25 μL的菜豆ISSR-PCR反应最优体系为：45 ng模板DNA，1 U Taq酶，2 mmol/L Mg²⁺，0.6 μmol/L引物和0.1 mmol/L dNTP，在此基础上对循环次数进行优化，最终确定最佳循环次数为45次。利用该体系，选取引物823对8份材料进行扩增，验证了该体系的稳定性。本研究旨在建立菜豆ISSR反应的最优体系，为今后利用该分子标记技术进行有关菜豆种质及遗传方面的研究奠定技术基础。

菜豆；ISSR；体系优化